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Elena Blázquez1,2, Joan Pujols1,3, Joaquim Segalés1,3,4, Chia-Yu Chang1,3, Jordi Argilaguet1,3, Fernando Rodríguez1,3, Javier Polo2,5*
1IRTA, Centre de Recerca en Sanitat Animal (CReSA), Barcelona, Spain, 2APC Europe, S.L. Granollers, Spain, 3OIE Collaborating Centre for Emerging and Re-emerging Pig Diseases in Europe, IRTA-CReSA, Barcelona, Spain, 4Departament de Sanitat i Anatomia Animals, Universitat Autónoma de Barcelona (UAB), Barcelona, Spain, 5APC LLC, Ankeny, IA. USA – javier.polo@apc-europe.com
材料和方法
选取24头24日龄断奶仔猪，随机分为对照组(n=16)和SDP猪 (n=8)饲料处理组。选择8头对照组猪作为直接接种动物(特洛伊木马猪)，饲喂对照饲粮。
在养殖区，将试验猪分为2组，每组8头，在整个研究过程中继续喂食各自的日粮。研究的第24天，所有试验猪鼻内接种2 mL 105 PFU的IRTA-CReSA ASFV疫苗(BA71ACD2)(2)。接种后第19天(pv)， 8头未接种的特洛伊木马猪肌肉注射1 mL 103 GEC的ASFV Georgia 2007/01毒株。接种后2 天，每个处理组引入4头特洛伊木马猪，使接种后的试验猪直接接触ASFV(特洛伊木马与接触猪的比例为1:2)。
当特洛伊木马猪表现出该疾病的临床症状时，就对其实施安乐死。每周采集血液样本、鼻拭子和直肠拭子，直到研究结束(41天 pv)。对所有猪实施安乐死，并取颌下腺、咽后、胃肝淋巴结(LN)、脾脏和扁桃体样本收集。对所有样本进行RT-PCR和DIVA-PCR分析，以区分ASFV疫苗和野生株。此外，对所有血清样本进行抗ASFV特异性lgG和IgA抗体分析。
结果和讨论
接种疫苗的对照饲粮组(V+ control)， 1头猪接种前死亡，1头猪因急性脑膜炎死亡，死亡时间为接种后31天pv(暴露后第10天)。接种疫苗的SDP组(V+SDP) ，在第21天1头猪安乐死，使暴露期平衡每组猪头数至7头，以保持两个实验组特洛伊木马猪与接触猪的比例。另一头猪因肠脱垂于第35天(暴露后14天)安乐死。
两组均在41天 (暴露后20天 )完成实验，每组6头。正如预期的那样，两组特洛伊木马猪的死亡时间在接种ASFV病毒后5 – 8 天之间，其发烧、病毒血症、鼻和粪便病毒排泄以及组织样本中的Ct值相似。
在暴露期间，对照组有4/6头未出现发热，另外2头在研究结束前第20天出现直肠温度峰值> 40.5°C。V+SDP组无发热，血、直肠拭子均无PCR阳性。在暴露期间对照组，血液、鼻拭子或直肠拭子中至少有1天PCR阳性的猪数量高于SDP组。
5/6头饲喂对照饲粮的猪在暴露20 天 时的组织样品中ASFV呈PCR+ (P< 0.05)，但Ct值远高于特洛伊木马猪。SDP饲喂的猪在攻毒后任何时间的组织样本都没有检测到ASFV的 PCR阳性 (表1)。处理组之间抗ASFV的IgG或IgA滴度没有差异。正如预计的，暴露前发现的少数PCR+样本是疫苗(BA71ΔCD2) 的ASFV毒株，但暴露后所有PCR+样本是Georgia 2007/01毒株的DNA。
在以前的研究中，发现接种过疫苗的猪在暴露第28天 时可以清除大部分病毒(2)。然而，饲喂SDP可能通过改善黏膜完整性和细胞介导免疫来提高候选疫苗的有效性(1)。
表1: 研究结束时(第41天)出现ASFV PCR+组织样本的猪数量。SDPP提高了疫苗在ASFV暴露后降低特定组织中病毒水平的效率
SDPP 增加了接种猪ASFV-特异性 IFN- ϒ 分泌T 细胞 （ASFV-攻毒后第9天）
结论:
在本试验条件下，饲料中添加8%的猪血浆SDP可提高ASFV疫苗原型的效力。因此，在Georgia 2007/01毒株攻毒后，饲喂猪血浆SDP的猪比饲喂对照组日粮猪的血液、鼻腔和直肠病毒分泌载量更低。此外，SDP饲养的猪在解剖时(暴露20天)的任何器官均未检测到病毒，从而提供了一种新的营养策略，使用SDP以增强候选ASFV疫苗的效力，改善猪在ASFV条件下的健康状况。
参考文献
1. Pérez-Bosque et al., 2016. Porcine Health Management, 2:16.
2. Monteagudo et al., 2017. J Virology, 91(21): e01058-17.
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