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猪场介绍
此合作型猪场位于巴西的巴拉那州，由两个猪场（PPU）和一个人工授精中心（AIC）组成。两个猪场相距60公里，人工授精中心（AIC）与1号猪场（PPU1） 相距35公里，与2号猪场（PPU2）相距60公里（图1）。
图 1. 猪场与人工授精中心之间的距离.
2011年3月，猪场的管理人员在报告中称母猪的返情率增加（17到28天，周期性和非周期性，返情率为22%），并在人工授精后几个小时内出现粘液性、白色到棕色（巧克力色）的外阴阴道分泌物。后备母猪的发病率最高，但经产母猪也会受到影响。断奶母猪所在猪舍的温度控制在21° C，相对湿度为60-70%，断奶母猪在此度过至少妊娠前期7到8周的时间。
两个猪场均出现返情率增高的问题。咨询相关兽医后，我们对两个猪场和人工授精中心的生物安全措施进行了排查。我们首先怀疑返情率增高是否因饲料污染了霉菌毒素，因此饲料公司对饲料进行采样、监控、定量检查，但是并未在饲料原料中发现霉菌毒素。
健康状况
猪群为猪繁殖与呼吸综合征及伪狂犬阴性，而猪肺炎支原体阳性。在日常运作中，猪场采取了适当的生物安全措施，从而可对疾病进行良好的控制，临床上急性或慢性疾病的典型症状发生率低。
商品猪场的后备母猪从繁育商购买断奶后第一代仔猪。此繁育商使用的是自场的曾祖父代和祖父代母猪。外场购买的曾祖代和祖代的公猪精液，符合基因改良的要求。公司每月生产7500剂。
人工授精中心
人工授精中心是一个现代的半自动化技术机构，并在过程中实行合理的废物利用。公猪的体内无针对猪繁殖与呼吸综合征、伪狂犬、细螺旋杆菌、布鲁氏杆菌的抗体，每6个月对其进行针对猪丹毒、细螺旋杆菌、细小病毒的疫苗免疫。它们所在的猪栏长7.5m，温度控制在21° C（有4-6° C的浮动），相对湿度为60-70%，光照时间为12-14小时。
精液制备室配备一个排液槽，实验室被合理地分成清洁区、污染区和中间区。实验室采用反渗透技术来获得用水。所有的器械均为不锈钢材料，精液的操作过程中所使用的是一次性材料。精液被分装保存于塑料管中。
技术性监控
对于人工授精的监控主要是通过采集用水、精液原液和稀释后的精液，以及精液生产和操作过程中所用的耗材进行检测。表1为检测结果。
表 1. 细菌学.
| 样本 | UFC / mL – 病原 |
| 经反渗透技术处理的水 | 无生长 |
| 从匀浆机收集的含有稀释液的水 | 36 CFU |
| 含有稀释液的浸片水 | 有生长并分离到洋葱伯克霍尔德氏菌 |
| 含有稀释液的水 | 有生长并分离到洋葱伯克霍尔德氏菌 |
| 匀浆袋/ 螺旋 | 有生长并分离到洋葱伯克霍尔德氏菌 |
| 收集管 | 无生长 |
| 封装机的容器 | 无生长 |
| 吸管桶 | 10 CFU |
| 封装机的喷嘴 | 无生长 |
(CFU) 菌落形成单位
表 2. 稀释后精液的细菌学
| 样本 | 分离出的病原 |
| 1号稀释精液 | 洋葱伯克霍尔德氏菌 |
| 2号稀释精液 | 洋葱伯克霍尔德氏菌 |
| 3号稀释精液 | 洋葱伯克霍尔德氏菌 |
| 4号稀释精液 | 洋葱伯克霍尔德氏菌 |
结果
经确认，匀浆机的水槽（螺旋处和水槽上铺的一次性塑料袋）在之前曾有过污染。水槽（塑料袋和螺旋）中高浓度的病菌造成瓶装精液的污染，且与稀释水槽中分离出的菌株一致。
结论1: 水槽中有遗弃的塑料袋，每周仅仅更换一次。建议在每次精液制备完成后，更换一次性耗材。
猪场调查 (猪场1)
在猪场的调查过程中，采集尿液，将开始的几滴弃去，用无菌容器只收集尿液的中间部分，并在操作的全过程采取无菌措施。样本立即冷冻后送往实验室处理。
实验室化验结果表明，15%的尿液样本经培养后有洋葱伯克霍尔德氏菌生长。此细菌常见于土壤或水中，并可在潮湿的环境中存活很长时间。一些研究表明，洋葱伯克霍尔德氏菌与人类的呼吸疾病中出现的囊性纤维化有关。
我们也选择了一头外阴阴道分泌物较多的母猪，其临床的生理指标均正常，并且未出现食欲不佳或发烧（直肠温度为38.7 ° C）。临床上唯一的异常是在子宫粘膜处有粘液的存在且粘膜充血。此猪在近期曾接受人工授精（第一次输精在上午进行，样本的采集是在下午黄昏时刻）。
图1. 图中显示出外阴分泌物.
用拭子采集这些分泌物进行细菌分离。下表为化验结果。
表 3. 细菌分离结果
| 样本 | 分离出的病原 |
| 阴道黏膜 | 洋葱伯克霍尔德氏菌 |
| 宫颈黏膜 | 洋葱伯克霍尔德氏菌 |
| 子宫上皮 | 洋葱伯克霍尔德氏菌 |
| 膀胱黏膜 | 无生长 |
| 图 2. 其中一只母猪的生殖道. | 图 3. 切开子宫颈，拭子采集分泌物. |
图 4. 子宫颈和子宫上皮处有粘液存在.
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图6 .膀胱的大体剖检的变化 |
我们使用阴道窥镜对其它近期接受输精并表现有同样临床症状的母猪进行外阴阴道分泌物的采集，使用阴道窥镜可更好地开启阴道并可采取更深部位的粘液。我们选择了一头临床症状相同、并已经接受输精的未初产母猪，处死后进行剖检。将整段生殖道取出，切开后采集宫颈、阴道、子宫角处化脓的粘液，进行细菌培养和分离。
结论2 : 在所有进行细菌分离的材料中，检测到了同一种细菌：洋葱伯克霍尔德氏菌。
我们采取了以下的管理措施：
1. 给患病母猪注射头孢噻呋；
2. 淘汰阴道反复产生分泌物的返情母猪；
3.采用高温灭菌法将实验室的所有被污染的耗材进行消毒；
4. 每日使用一次性塑料袋罩住稀释槽；
5. 提高工作人员基本的卫生保健水平及实验室采精规范，在精液的制备过程中使用一次性口罩；
6. 每15天到人工授精中心和猪场进行检查，收集精液生产过程中每一步的相关材料，直到猪群的情况恢复正常；
7. 避免精液储存时间超过72小时；
8. 细菌污染在实验室可于三周内解决，但是损失延续到十周。
所用的稀释液中含有抗生素，但如下表抗菌谱所示，该菌的耐药性强。因此需要在稀释液中添加洋葱伯克霍尔德氏菌敏感的抗菌剂。
表 4. 抗菌谱-RG 131
| 抗生素 | 洋葱伯克霍尔德氏菌 (稀释液+水) |
洋葱伯克霍尔德氏菌 (88645稀释的精液)) |
||
| 抑菌圈 | 敏感性 | 抑菌圈 | 敏感性 | |
| 阿莫西林 10 μg | 6 mm | R | 6 mm | R |
| 氨苄西林 10 μg | 6 mm | R | 6 mm | R |
| 安普霉素 15 μg | 16 mm | S | 16 mm | S |
| 头孢噻呋 30 μg | 26 mm | S | 26 mm | S |
| 粘菌素 10 μg | 6 mm | R | 6 mm | R |
| 恩诺沙星 5 μg | 26 mm | S | 26 mm | S |
| 奇霉素 + 林可霉素 100+9 μg | 14 mm | R | 14 mm | R |
| 氟苯尼考 30 μg | 16 mm | I | 16 mm | I |
| 庆大霉素 10 μg | 6 mm | R | 6 mm | R |
| 新霉素 30 μg | 6 mm | R | 6 mm | R |
| 诺氟沙星 10 μg | >30 mm | S | >30 mm | S |
| 青霉素 G 10 μg | 6 mm | R | 6 mm | R |
| 磺胺二甲嘧+TMP 25 μg | 6 mm | R | 6 mm | R |
注: S = 敏感, R = 抗药, I = 中度敏感
方法；琼脂糖扩散
参考：CLSI（临床和实验室标准化协会）
