PCV2血清学方法面面观

PCV2在发病和健康猪群中感染率都很高，因此利用血清学方法进行该病的诊断受到质疑。众所周知，环状病毒的诊断必须以Sorden标准为基础。然而，基于检测方法的种类、可获得性、实验条件以及实验目的，血清学试验具有一定的诊断意义。

由于间接免疫荧光法（IFA）试验不适宜在普通环境下实施，免疫过氧化物酶单层实验（IPMA）因其繁琐性仅仅用于科学研究，在此我们不对二者进行讨论。但是IPMA技术可以作为免疫酶技术或酶联免疫吸附测定（ELISA）的参考方法。

ELISA

常见的ELISA方法主要有以下两种：

• 阻断ELISA，其目的是检测IgM和IgG水平。

• 间接ELISA，旨在检测所有抗体。

阻断ELISA

市场上有专门的商业试剂盒，适用于以下目的：

• 检测感染时间，推测动物是否处于病毒活跃期，前提是猪群没有接种过疫苗，或者是虽然接种过疫苗但是抗体滴度比较低或使用阻断ELISA无法检测到抗体。

• IgM和IgG水平的关系能够推测感染时间和动物是否处于病毒活跃期（见图1）。

图1 - IgG和IgM应答的变化（利用阻断ELISA测量）及感染PCV2后病毒血症(Segalés et al. 2005)

在感染后第7-14天检测到 IgM，一周后检测到 IgG。感染后三周二者的血清阳性率相似。随后，IgG持续存在，但是IgM则逐渐消失。它们之间的相对距离可以推出感染时间。

• PCV2在各个年龄段猪群中的传播情况（见图2）

图2-圆环病毒病发病猪场（未接种疫苗）的血清横向分布图

该猪场10周龄以上猪群开始患断奶仔猪多系统衰竭综合征。总抗体水平首先下降，表明随着时间的推移，母源抗体随之下降，在9周龄时总抗体水平升高，表明PCV2感染后的血清转化。

很显然，我们在解释阻断ELISA的结果时必须谨慎，因为感染并不等于着患病，特别是在猪群已接种过疫苗的情况下。另一方面，由于PCV2在母猪群中感染率很高，因此这个试验方法不适用于成年母猪。阻断ELISA通常仅用于对仔猪和生长猪的PCV2检测。

间接ELISA

许多试验方法可以用来检测总抗体水平 ，间接ELISA可以用于以下目的：

• 母源抗体变化以及进行母源抗体干扰的相关研究。

• 作为阻断ELISA IgG/IgM 血清横向分布图的补充（见图2）

• 母猪及仔猪免疫状态的评估（初乳摄入量）

• 对疫苗质量的评估¹（见图3）。

图3 断奶仔猪接种PCV2疫苗后的横向血清分布图

IgG应答反映了母源抗体的变化和接种疫苗后血清转化。由于未感染，IgM始终保持基础水平。两个间接ELISA表现不同：间接ELISA A对母源抗体的检测反应灵敏，但是仅检测出了较弱的疫苗应答。间接ELISA B更加敏感，对疫苗应答检测较好。很显然，两个实验测到了不同的抗体。

需要指出的是，这些血清学试验方法与接种疫苗后牲畜受保护的水平无关；因为可能检测不到一些疫苗的应答，因此未检测到抗体应答，不代表疫苗没有效果。

另一方面，不同的血清学试验检测出不同的结果是很正常的。因此以下情况是可能的：同样一个疫苗，一个血清学试验的结果小而且不一致，但是另一个血清学试验却能做出完美疫苗反应图（图3）。如果忽略以上事实，就可能导致对实验结果做出错误的解释。而如果能对各种血清实验比较了解，就会正确地加以运用，对了解流行病学或疫苗效果很有帮助。解释血清学试验结果的时候，我们推荐使用一个完备的取样方案，还需要了解取样时猪所处的环境，并且咨询有经验的专业人士。

最后，必须强调的是，尽管我们经常谈到滴定度，但是本研究中提到的血清学方法都是定性的，即那些超过阈值的血清被认为是阳性的，低于阈值视为阴性；因此，试图从定性结果中做出定量解释是很困难的。作为一种替代方法，一些供应商建议分析同一样品不同稀释度，并通过大量的数学计算得到半定量的结果。另外一些人则建立比率或指标值的概念，有时称为S/P比率，即样品的读数值与阳性对照值分别减去阴性对照值后二者的比值。因此，我们在根据定量结果做出判断时必须谨慎， 但根据实验目的和方法，血清学实验还是有一定意义的。

¹ 已经开发出一个的ELISA试验以检测疫苗的质量，该检测方法基于检测针对于杆状病毒的抗体应答水平