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ASF 诊断-不仅仅是读取实验室结果

他能使用的所有工具对疾病作出判断。一位在中国有经验的专家回顾了如何诊断ASF。

17 3月 2022
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非洲猪瘟对所有日龄的猪来说都是一种严重的病毒性疾病。近年来,它摧毁了许多国家的养猪业。ASF实际上传播相当缓慢,通过适当的措施可以减少其传播。早期确诊是避免传播的关键因素。非洲猪瘟的初步现场诊断可根据临床症状和尸检结果进行。

临床症状:

在疾病的初始阶段,经常发现动物因腿部、耳朵和四肢发绀而急性死亡。通常会出现40-42度高烧、呕吐、可能带血或黑色的腹泻(照片1,右侧)、抑郁、流产(照片1,左侧)、带血的鼻涕(鼻出血)和死亡数量不断增加。

照片1: 流产(左)和母猪血性腹泻(右)。
照片1: 流产(左)和母猪血性腹泻(右)。

低毒力(疫苗)菌株会导致轻度慢性非典型疾病,几乎没有死亡。母猪通常表现出慢性呼吸道疾病和慢性不育。患有慢性非典型疾病的猪出现明显疾病或观察到的临床症状之前的时间较长,这通常被猪场解释为较长的潜伏期

尸检时的病变

  • 会厌和气管可见发红,一般为间质性肺炎伴小叶间水肿。有时有类似传染性胸膜肺炎的纤维蛋白坏死性胸膜肺炎。
  • 可能存在纤维蛋白性心肌炎和心包炎,胸部和腹部可能有过量的血性或血性液体。
  • 肠系膜淋巴结,尤其是胃-肝淋巴结可能肿大、水肿,并且在切面上出现坏死性出血(照片2)。
  • 脾脏可能会扩大并伴有多发性梗塞,也可能基本正常。
  • 肝脏常见明显出血。
  • 肾脏可能有多处梗塞,以及瘀点和瘀斑性出血(照片3)。可能有明显的肾周水肿。胃底经常严重发红和糜烂,螺旋结肠可能充满血性内容物。在腹部内脏常可发现出血。
  • 脑部可能有明显的纤维蛋白性脑膜炎。
图2:胃肝淋巴结出血坏死。
图2:胃肝淋巴结出血坏死。
照片3:肾脏水肿和点状出血。
照片3:肾脏水肿和点状出血。
猪之间病变的严重程度是可变的,通常建议对多头猪进行尸检。

尸检应在遵循生物安全措施的情况下进行,但尸检不会给受感染猪场带来特别的疾病危害,并且确实提供了通过不太积极的诊断方法无法获得的有价值的信息。

实验室技术

PCRASF的诊断通常通过核酸检测阳性和排除类似病变的其他常见原因来验证。最常见的是P72基因的PCR。肺(我们实验室的首选样本)、肾、脾、淋巴结、血清和血液都是PCR的良好检测样本。口腔拭子和口腔液体非常流行,但病毒量通常比血液和组织中发现的要少几个对数,因此假阴性结果相当常见。荧光定量PCR和常规PCR用于检测。常规PCR为基因测序提供了一种便捷的方法。

在使用基因缺失疫苗或意外引入基因缺失病毒株变体的情况下,某些动物的核酸检测可能会失败,因为与野生型野外病毒相比,产生的病毒量要低得多。但是,如果可以从组织或血液中获得良好的样本,则可以对疫苗病毒的缺失基因进行核酸检测。在P72基因检测呈阳性后,可以对基因缺失疫苗进行PCR测试,寻找来自MGF 360505R CD2vDNA,以确定问题病毒是田间病毒还是基因缺失疫苗病毒。

环介导等温扩增法(LAMP)提供了一种快速、廉价、灵活且极为敏感的核酸替代方案,几乎不需要专门的设备,并且似乎非常适合大规模检测,如屠宰时的监测/筛查。

当从感染到检测的时间过程已经足够长,以至于病毒血症和组织中存在病毒的时期已经过去,或者如果没有良好的尸检样本时,血清学可用于确定动物是否已暴露于ASF病毒。

有许多 ELISA 试剂盒可用于寻找针对 P72P30 和其他 ASF 抗原的抗体的存在。此类检测试剂盒通常用于识别并淘汰故意或意外接触非法疫苗病毒的母猪群体。

有一种抗原捕获 ELISA卡测试,但它严重缺乏灵敏度,并且它的使用通常仅限于那些需要快速假阴性结果的情况。

组织病理学检查发现全身性血管炎伴有多器官梗塞、出血和血栓形成,特别是肺、脾、淋巴结、肾、脑和肠道。淋巴结和脾脏有大量淋巴样破坏,肺泡巨噬细胞空泡化。常见结肠上皮坏死和溃疡(照片4)。

图 4. 血管血栓形成、梗塞、结肠黏膜溃疡。
图 4. 血管血栓形成、梗塞、结肠黏膜溃疡。

使用组织病理学来验证基因缺失疫苗的典型慢性病变可能非常有用。 接种了这些 ASF 疫苗的猪通常会出现慢性愈合和纤维化血管病变,包括肠道、肝脏、淋巴组织、心脏和肾脏中的血栓和梗塞。淋巴结可能有出血、坏死和淋巴破坏以及纤维化和愈合区。接种疫苗的繁殖动物可能有大面积的肺坏死和纤维化区域,这些区域经常被误认为是慢性传染性胸膜肺炎。疫苗病毒对猪可能并不致死,但猪通常无法清除疫苗病毒。

我们应该记住,PCR是一个很好的工具,但不是绝对正确的,而且,相对于实际的猪场情况,并不是100%准确。这并不是说PCR不可靠。相反... PCR结果仍然是诊断测试结果,而不是诊断。诊断师是一名调查员,使用他能使用的所有工具对疾病作出的判断。当怀疑ASF时,应一如既往地遵循生物安全措施,甚至应更加注意。但有几种类似于ASF的疾病,一般来说,除了ASF阴性检测外,还需要诊断问题的实际原因,这可能需要更多的观察干预,而不是进行微创切口通过腹股沟淋巴结或脾脏进行。

来源:pig333

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