精液剂量制备控制点：精子浓度（2/2）

精子浓度

精液的精子浓度（精子数/ ml）是一个非常重要的参数，因其和精液的体积将决定可以制备多少剂量。毫无疑问，这是整个精液制备过程中最关键和最具争议的一点，因不同的测量设备间存在显著的差异，缺乏定期和连续的校准可能导致配制浓度低于所需浓度(提供适当的生育能力)，或者相反，配制浓度过高，从而降低公猪的生产潜力。目前，猪人工授精站需要生产至少两种剂量：宫颈授精剂量（80-100毫升）或宫颈内授精剂量（30-60毫升）。因此，在评估浓度时，尤其是宫颈内授精时，需要的精度较高，因其使用的精子量较少（Bortolozzo等人，2015年）。

评估浓度的分析方法可以是手动或自动的。血细胞计数器（手动方法：Bürker，Neubauer或Thoma计数池等）（图1a）已被电子设备（自动方法）（图1b）取代，主要是色度计，因其可更快的计算（Camus等人，2011）。

无论采用何种方法评估浓度，在测量过程中都会产生误差，这可能是由于精液制备方法错误或测量设备故障造成的。为减少计算错误的可能性，应定期对设备进行校准。有趣的是，为了校准这些电子设备，我们仍然使用诸如血细胞仪之类的手动方法。计数池仅由一个玻璃装置组成，该装置具有一个已知体积的计数池，在该计数池中加入要分析的精液样本。其精度取决于计数区域的大小。计数区域越大，重复测试的次数越多，得到的误差就越小。

图2比较了用比色计和Bürker血细胞计数器测得的不同精液样本（1-14）的精子浓度（精子数×106 / ml）

在评估浓度的过程中有几个方面可能会影响结果的准确性。例如，考虑到精子的沉降速度很快，在采集待评估精液样本时，适当地使收集杯内的精液均匀化是非常重要的。如果收集和分析之间的时间间隔超过10分钟，那么精液的上半部分的精子浓度将低于真实的精子浓度。

另一方面，图3比较了擦拭和不擦拭自动移液管顶端外壁时的精子浓度。当我们把移液管插入精液管以吸取精液样本时，有些精子附着在移液管尖端的外壁上。当将移液管内精液加到比色皿时，移液管外壁的精液会加到样品中。结果表明，无论是否擦拭移液管顶端外壁，所获得的精液浓度的差异可高达20%（图3）。

计算精液浓度的最终目的，是确保人工授精站所提供的精液剂量达到每次授精所需的最低精子浓度，没有误差。一种简单的方法可以帮助我们评估已稀释的精液在包装前的浓度，是用不同的设备重新评估浓度，从而评估实际浓度和期望浓度之间的差异。可以使用可快速直接读取稀释精液浓度的设备（图1c）。

结论

综上所述，为了最大限度的确保人工授精站所制备精液的质量，需要一份质量控制协议，其中至少包括表1中提到的要点。作为精液剂量制备的源头，应考虑三点：正确管理公猪，因为这将增加公猪的生殖能力和精液质量，适当的设施和正确的管理，以便进行适当的精液收集和处理程序。一旦进入实验室，所有的制备过程都旨在准确评估精液的质量参数，并确保制备出最高质量的精液剂量，以确保人工授精后的高授精率。目前，人工授精站的方法和方案越来越多地演变为通过减少精子数量获得精液剂量，例如用于宫颈内授精或固定时间的人工授精（Ulguim等人，2016年）。在这种情况下，人工授精过程中使用的精子数量都在减少，因此适当的精液剂量准备对于实现猪场的正确生产率非常重要。

表1：正确管理和准备精液剂量的控制点。

来源:pig333