使用处理液进行蓝耳病病毒诊断

背景

在过去几年中，采样和诊断技术的改进使得猪场采样更加容易，如使用血液汇集技术和口腔液体。然而，兽医和生产者一直在寻找更灵敏，更便宜，更快速的猪群采样技术。实现这些目标的方法之一是通过常规操作，例如仔猪阉割和断尾，这是母猪场常规操作程序的一部分。我们建议使用处理液（PF），其是工作人员在常规断尾和阉割时，在桶底积聚的液体。本研究旨在通过实时PCR评估处理液的准确性，以评估母猪群中的猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）状态。

材料和方法

在一个暂定阴性的猪场爆发疫情后进行采样。在连续8周期间，每周选择不同胎次的10窝仔猪，在断尾和阉割（3日龄）时采集样本。窝次的选择应能在空间上表征猪舍和胎次。对所选全部仔猪进行放血和检测，以将其用作金标准比较样本。同一窝仔猪的睾丸和尾巴放在同一个Ziplock袋中。这些组织在袋中保存至少两小时。然后用无菌移液管取出液体并置于无菌血清管中。血液和处理液都在猪场离心分离，并在冷藏条件下运送到实验室。所有样品均采用实时RT-PCR检测。

图1.用Ziplock袋收集的尾巴和睾丸

结果和讨论

构建了比较血清状态和处理液状态的2x2（表1）表格。如果其中至少有1头仔猪血清呈阳性，则认为该窝呈阳性。根据CT阴性阈值低于37.5，而不是传统的40对阳性进行分类，以便将CT值在可疑范围内（35-40）的样本包括在分析中。该方法的灵敏度（95％置信区间）和特异性（95％置信区间）分别为83％（63-95％）和92％（82-98％）。 两种类型样本间的一致性良好（Kappa：0.76（95％置信区间：0.53-0.98％））。检测到4个假阳性和4个假阴性。假阴性仔猪的血清具有低病毒载量（高Ct值），当稀释时，这些样本的Ct值降为负数。尽管极为小心地转移处理液，也可能出现交叉污染，因我们观察到4个假阳性结果。

当比较低胎次组（第一和第二胎）与高胎次组（超过第二个胎）时，阳性处理液百分比间存在统计学差异（p <0.05），低胎次组的阳性率较高。这与Cano等人（2008）的观点一致。他们在试图确定与PCR阳性仔猪检测率较高相关的风险指标时发现了这一现象。

只要有一头仔猪呈阳性，则处理液显示为阳性，表明处理液是一种非常灵敏的样本，可以通过它了解仔猪群的状况，从而了解猪群的整体状况。同时，这些结果强调了收集睾丸和尾巴在减少疾病的传播中的重要性。此外，可以从处理液样本中分离蓝耳病病毒，并对其进行测序。

该研究的一个局限性是它仅代表采样猪场的情况。

当然，该技术仅能在允许阉割和断尾的国家使用。在动物福利法建议使用灼烧断尾的地区，需要进一步研究以阐明使用该样本作为诊断工具的可能性。

表1：使用血清作为黄金标准的窝次状态的2x2表。

结论

即使在爆发后的一段时间内（约6个月），处理液都是检测仔猪蓝耳病病毒的有效样本，尤其是产自低胎次母猪的仔猪。此外，应将睾丸和尾巴收集在一个桶中，因其是产房中蓝耳病病毒的潜在传播载体。

来源：pig333