猪圆环病毒2型(PCV2)是猪群中一种常见的病毒。已证实该病毒会引起新生仔猪和成年猪病毒血症和病毒脱落。但是,通过直接或间接的预防措施可以降低PCV2感染。据报道,1999年已证实PCV2可经胎盘感染胎儿,并引起母猪繁殖障碍。本研究的目的是:1)选择PCV2血清阳性的后备母猪,人工输入含PCV2b的精液,检测其临床症状及病理情况;2)在PCV2阳性猪场,采集接种或未接种抗PCV2疫苗的后备母猪组织及胎儿样品,检测其病毒血症、病毒脱落和病毒量,检测人工输入被PCV2感染的精液后的问题。
第一个实验,选取9头后备母猪,随机分成两组:其中6头人工输入含PCV2精液,另3头输入不含PCV2的精液。在被感染的后备母猪中,实验开始时抗PCV2滴定度最低的猪(1/100)和在实验过程中达到同样滴定度的猪都表明:随着时间的推移,血清明显转化,它们的胎儿都呈PCV2阳性。通过PCV2抗原的免疫组织化学呈色反应发现,一个胎盘的绒毛上皮细胞呈轻微灶性坏死。结果表明PCV2血清反应阳性的后备母猪会被子宫内的PCV2感染,较低的抗体滴度会增加胎儿被感染的几率, PCV2造成的胎盘损伤表明PCV2感染胎儿可能有其它原因,在人工授精前后感染PCV2可能会影响胚胎。
图1.滋养层凝固性坏死。着色剂为苏木素和伊红。
为了探讨PCV2疫苗的保护作用,采用同样的实验设计:从PCV2阳性猪场选取15头后备母猪,随机分成3组,12头人工输入含PCV2的精液,其中6头分别在人工授精前5周和前两周,接种2次抗PCV2疫苗 (接种疫苗感染组 = VI);其中另6头未进行疫苗免疫,但是在同一时间人工输入含PCV2的精液 (未接种疫苗感染组 = NVI);第3组未进行疫苗免疫,也未被精液感染(对照组 = C)。
主要结果如下:a) PCR检测发现大多数NVI 和 C组后备母猪在授精前和观察期(一直到人工授精后56天)都有PCV2病毒血症,相反,VI组血液样品阳性检出率很低;b) 与NVI和C组相比, VI组阳性样品数量明显较低。c) PCR检测发现,VI组胎盘PCV2阳性率很低,胎儿的PCV2阳性率为0,而NVI 和 C组PCV2阳性检出率很高(NVI组1个胎儿和3个羊水以及C组1个胎儿);d) VI组中极少样品达到了每毫升PCV2基因拷贝量≥ 108的高病毒量。VI组抗体水平要低于NVI 和 C组,原因可能是随着时间的推移免疫力下降。并且抗体水平可能并不只受疫苗影响;PCV2的粘膜免疫反应可以防止该病毒进入,导致病毒脱落,降低胎儿和羊水被感染的可能性。
图2:PCV2b抗原在坏死层的免疫组织化学褐变。二氨基联苯胺显色和苏木素复染。
在这些实验中,给后备母猪人工输入含PCV2精液会引起胎儿被感染,并引起胎盘炎;在人工输入含PCV2精液前接种疫苗的后备母猪,其病毒量明显下降,分泌的病毒量也较低,这与保护胎儿相一致。
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