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简介
饲料安全是猪群中的一个主要问题，需要非常注意可能的原料和饲料的真菌污染以及霉菌毒素的产生的风险。 霉菌毒素是由丝状真菌产生的次生代谢产物。 它们是在收获前，期间和之后在各种原材料上产生的。从猪健康角度来看，重要的主要霉菌毒素是单头孢霉烯，特别是脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON），黄曲霉毒素，赭曲霉毒素，伏马菌素和玉米赤霉烯酮。此临床病例说明了定期测试原料中所有霉菌毒素对生长猪健康的重要性。
我们于2016年2月份接到布列塔尼的一个存栏350头母猪的自繁自养猪场的电话，其断奶仔猪出现临床问题。 临床症状是眼睑和额头肿胀，运动失调不协调，呼吸困难和猝死。 于饲料转换后几天出现。对有临床症状的活仔猪的实验室诊断证实了大肠杆菌O139K82的作用。
猪场概述和起因因果分析
该猪场位于布列塔尼（法国）的生猪高密度生猪养殖区。28天龄时断奶，同时接种猪肺炎支原体（Mhyo）和猪圆环病毒2型（PCV2）疫苗。
平均仔猪断奶时平均体重为7.5-8kg。 在断奶后的第一阶段，体重达到12-14公斤前，仔猪饲喂商业饲料。在3天换料后直至体重达到25公斤期间，仔猪饲喂猪场自配料。
表1： 2016年6月第2阶段饲料配方-猪场自配料
| 小麦 | 40% |
| 大麦 | 30% |
| 脱水粕(大豆, 菜籽) 和油+ 维生素和矿物质复合物 | 30% |
临床症状在换料后数天出现（大约40日龄）。
猪群的健康状况如下：
表2：2016年2月猪群健康状况
| 支原体 猪流感病毒 |
断奶仔猪无临床症状 |
| 蓝耳病毒 | 阳性稳定猪群 |
| 圆环病毒2型 | 断奶仔猪疫苗接种 |
Clinical report
图1：临床爆发和接种程序的实验室分析
第一阶段部分（2016年2-6月）
实验室诊断
当参观猪场时，所有患病仔猪的状况良好。临床症状是眼睑和额头肿胀，不协调运动失调，呼吸困难和猝死。
尸检结果
在Labofarm®实验室（Finalab 兽医实验组，Loudéac，布列塔尼，法国）对两例具有临床症状的活的未用药仔猪进行了尸检。观察到面部（照片1）和眼睑的皮下组织及螺旋结肠的肠系膜（照片2）水肿。还观察到肠系膜淋巴结水肿和腹腔内大量的液体。这些与临床症状相关的病变揭示水肿病（ED）。
图片1：面部皮下组织水肿
图片2：螺旋结肠肠系膜水肿
细菌学
对小肠，肠系膜淋巴结，脑和脑膜，心脏血液进行了细菌培养。
所有样本均培养出了溶血性大肠杆菌0139K82
毒力因子
通过多重PCR进行基因分型以确定分离物中存在特异性菌毛和毒素基因：
表3： 分离的大肠杆菌菌株的毒力因子
| 毒力因子 | 0139K82 |
| STa | 阴性 |
| STb | 阴性 |
| LTa | 阴性 |
| Stx2e | 阳性 |
| F18 (F107) | 阳性 |
| F4 (K88) | 阴性 |
| Aida | 阴性 |
根据断奶仔猪临床症状和的实验室诊断结果表明，水肿病（ED）可能是造成该猪群的高死亡率的原因。
风险因素调查
格式化控制策略前的第一步是研究易诱发水肿病的危险因素。
动物：每个猪栏混合饲养3窝仔猪。未发现母猪胎次的关系
设施：设施管理良好 猪场人员遵循全进全出系统，卫生严格。 环境应激低（几乎没有温度变化，通风正确，舒适性好）。
水质：取样时饮用水的细菌和微生物质量在良好。每天早上净化水线，猪场员工定期进行氯浓度控制。
营养：猪场于症状爆发数周前开始使用自配断奶仔猪第2阶段饲料。
- 分布：仔猪自由采食。当猪场员工观察到首例水肿病时，仔猪禁食至少24小时
- 日粮配方：日粮配方正确，未发现第一阶段和第二阶段饲料蛋白质和能量水平之间的差异。
- 饲料颗粒大小：较慢的肠道转运时间和肠道淤滞使大肠杆菌有机会附着和繁殖（Pluske等，2002）并产生毒素。 据此，我们可以认为饲料颗粒大可能会引起水肿病爆发。另一方面，颗粒太小也可能对肠道疾病（例如胃溃疡）的流行有不利影响。必需定期进行猪场自配料粒度测定，此案例结果如下表所示：
表4：2月份猪场断奶第二阶段自配料颗粒大小
| 颗粒大小 | 临界点 | 猪场自配料 | |
| 推荐值1 | 推荐值2 | ||
| >3,15 mm | 0% | 0,50% | 0% |
| >2 mm | 25-35 % | 2,00% | 1,80% |
| >1 mm | 25,00 % | 35,80 % | |
| >0,5 mm | 20-40 % | 39 % | 32,00 % |
| >0,3 mm | 10-20 % | ||
| >0,25 mm | 27,00 % | 20 % | |
| <0,25 mm | 10-20 % | 6,50 % | 10 % |
2月，根据饲料生产商推荐值（推荐值1和2），饲料颗粒大小正确。
- 霉菌毒素：有几种不同的分析方法可用于霉菌毒素鉴定。在法国，饲料公司通常仅通过酶联免疫吸附测定（ELISA）来控制脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）水平。该测试快速，相对便宜。该猪场所有受控原料（小麦，大麦）和全价饲料中的霉菌毒素率都在临界值之下。原料和饲料被认为是霉菌毒素低风险。
控制措施
疫苗接种：我们建议猪场接种疫苗以增强仔猪的免疫力。在法国仅有一种商业注射疫苗可用于预防大肠杆菌水肿病。这种疫苗由转基因Stx2e毒素组成。 自5月下旬以来，对12日龄哺乳仔猪进行该疫苗的接种该疫苗。根据疫苗生产者，当疫情发生时，可能对40-45日龄仔猪起到保护作用。
抗生素治疗：对于以前未接种疫苗和受水肿病影响的批次，根据大肠杆菌菌株的灵敏度选择甲氧苄啶（5mg / kg bw）- 磺胺（25mg / kg bw）组合。
第二阶段（2016年6月-2017年1月）
一些断奶后腹泻（PWD）病例在6月份出现死亡。引起断奶后腹泻的是大肠杆菌K88 Stb。尽管接种了疫苗，仍可定期诊断出（7月和8月的实验室诊断）一些水肿病（大肠杆菌O139K82），且死亡率高于往年和前几个月。
控制措施的改变
饲料颗粒大小：于2016年8月再次测试颗粒大小
表5：8月断奶后第二阶段自配料颗粒大小
| 颗粒大小 | 临界点 | 猪场自配料 | |
| 推荐值1 | 推荐值2 | ||
| >3,15 mm | 0% | 0,50% | 0,20 % |
| >2 mm | 25-35 % | 2,00% | 9,30 % |
| >1 mm | 25,00 % | 48,80 % | |
| >0,5 mm | 20-40 % | 39 % | 24,60 % |
| >0,3 mm | 10-20 % | ||
| >0,25 mm | 27,00 % | 12,10 % | |
| <0,25 mm | 10-20 % | 6,50 % | 5 % |
颗粒大小比通常的推荐值高。为了得到与2月份相同的颗粒大小对加工过程进行了改进
日粮配方：10月份对日粮配方进行了改动。猪场自配料的纤维含量增高。日粮的营养值降低。通过增加大麦掺入率降低了蛋白水平和可消化能量。
表6：2016年2月和6月第二阶段自配料日粮配方
| 10月前断奶后第二阶段日粮 | 10月后断奶后第二阶段日粮 | |
| 小麦 | 40% | 20% |
| 大麦 | 30% | 50% |
| 商业补充 | 30% | 30% |
疫苗接种：12月份，进行了一项口服无毒活疫苗的试验，该疫苗含有F4阳性F18阳性Stx2e阴性菌株。接下来的2个批次在21天接种该疫苗。所有哺乳仔猪均单独服用。尽管采用了这种新的疫苗接种方案，断奶后腹泻和水肿病的存在仍在12月份的实验室诊断证实。
尽管改进了控制措施，下半年的死亡率仍较高
第三阶段（2017年1月）
面对疫苗接种失败，断奶后腹泻和水肿病的复发，我们决定再次考虑所有的风险因素（水质，饲料供给量，猪舍条件），并通过实验室Labocea色谱法分析每种原料中的霉菌毒素含量（ Ploufragan，布列塔尼，法国）。
Mycotoxins analysis
Labocea使用高效液相色谱（HPLC）和质谱分析来提供定量结果。这项技术是法国霉菌毒素的常规诊断方法。 该法可用于检测多种霉菌毒素。 对于每个猪场，测试检测样品中的所有霉菌毒素。猪场大麦和小麦中单端孢霉烯含量见下表：
表7：2017年1月大麦和小麦种单端孢霉烯含量（毫克/公斤饲料，12% 湿度）
| 霉菌毒素 | 推荐值 | ||
| 原料 | 大麦 | 小麦 | |
| 单段孢霉烯A型 | |||
| 蛇形菌素 (DAS) | 0 | 0 | |
| 15单乙酰氧基镰草镰刀菌醇 | 0 | 0 | |
| T-2 毒素 + HT-2 毒素 | 0,055 | 0 | |
| T-2 四醇 | 0,03 | 0 | |
| T-2三醇 | 0 | 0 | |
| 疣孢漆斑霉烯醇 | 0 | 0 | |
| 单端孢霉烯 B型 | |||
| 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 | 0,02 | 0,195 | |
| 脱氧雪腐镰刀菌烯醇-3-葡萄糖苷(D3G) | 0,01 | 0,015 | |
| 去环氧脱氧雪腐镰刀菌烯醇 (DOM-1) | 0 | 0 | |
| 15-O-乙酰基脱氧雪腐镰刀菌烯醇 | 0 | 0 | |
|
乙酰脱氧瓜萎镰菌醇 |
0 | 0 | |
| 镰刀菌烯酮X | 0 | 0 | |
| 雪腐镰刀菌烯醇 | 0,015 | 0,02 | |
| 脱氧雪腐镰刀菌烯醇等价物 | 0,9 (急性中毒) 0,2 (慢性中毒) |
0,955 | 0,31 |
不存在其他霉菌毒素或不具有显着的价值。
无法根据其个体毒性预测霉菌毒素的组合的毒性。进行了仅考虑一种霉菌毒素的关于霉菌毒素影响的研究，但霉菌毒素组合的作用可以是拮抗的，相加的或协同的（Oswald，2015）。根据这些组合效应，提出考虑所测试的所有单端孢霉烯的呕吐霉素当量，但据我们所知，没有标准化方法来评估霉菌毒素组合效果的科学共识。
在欧洲提出了霉在欧洲给出了霉菌毒素在饲料中推荐的临界值的推荐值。欧盟委员会在2006年8月17日的推荐值可能考虑呕吐霉素，玉米赤霉烯酮，赭曲霉毒素A和伏马毒素。有关于黄曲霉毒素和麦角病的欧洲联盟指令2002/32 / EC。
我们认为，对急性中毒，呕吐霉素临界值高于0.9毫克/公斤，12%湿度（欧盟委员会2006年8月17日的建议），对慢性中毒（每日摄入的食物），高于0.9毫克/公斤12％湿度对猪健康存在风险。
在此案例中，根据所用方程式，小麦和大麦中单端孢霉烯的呕吐霉素当量水平高于可接受的水平。即使在断奶后第2阶段全价饲料中稀释，单端孢霉烯的含量水平仍超过了每天仔猪饲料消费的关键风险值。
调整后的控制措施
根据这些结果，决定在猪场自配料（第2阶段日粮 - 早/中/晚期育成日粮 - 妊娠和哺乳期日粮）中加入2000ppm的霉菌毒素灭活产品。对所有料仓进行清洁和消毒。大麦，小麦和玉米的加工工艺已经改变。现在为了降低霉菌毒素风险，在碾碎谷物之前，应去除谷物收获，处理和储存期间之中产生的谷物粉尘。
目前仍接种水肿病疫苗
结果
这些变化后，畜群的全球健康状况有所改善。关注所有日龄。 断奶仔猪的死亡率降低，且育肥和育成猪的死亡率也有所下降。猪场人员注意到分娩和哺乳期间问题减少，断奶仔猪体重增加。
结论
需要格外注意原料和饲料的可能真菌污染以及霉菌毒素产生的风险。摄入霉菌毒素污染的饲料可引起急性疾病，摄入低剂量的真菌毒素也会在重复接触的情况下造成损害（Bryden，2012; Maresca等，2010）。 在霉菌毒素显示的大面积毒性作用之中，已经描述了免疫调节特性性质（Oswald，2015）。 这种影响增加了对传染病的敏感性：在此案例中，断奶仔猪更有可能发生水肿病和断奶后腹泻。 通过疫苗接种获得的免疫力被霉菌毒素摄入所损害。T-2毒素降低了对模式型抗原，卵清蛋白对细胞和体液应答的疫苗反应（Oswald，2015）。
此案例说明了霉菌毒素常规控制措施的重要性，严格监控和控制猪场饲料生产。尽管有成本，鉴于分析测定的重要性，建议进行完整的分析。在Labocea易获得这种技术，并可探讨在法国使用该技术进行霉菌毒素的常规诊断。
