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诊断PCVAD的观点

因为疫苗的接种效果不可能100%,所以在大猪群中偶然找一头PCVAD猪并不意外。一个人如何评估PCVAD在接种疫苗猪群中的影响?

过去15-20年里,PCVAD(以前被称为多系统衰竭综合征PMWS)及其发病率和影响PCV2感染的情况发生了巨大变化。早在2004年,PCV2在猪群中的流行率就很高,但往往没有任何症状,因此缺乏诊断这个病原相关疾病的信心。随着这个疾病在全球范围内蔓延,2000年,Sorden概括了PCVAD的定义和诊断标准(如图1),被兽医界广泛接受并作为第一手资料。Sorden吸收了典型临床症状和典型病变,论证了病毒在病例中的定义和诊断标准。

图1:PMWS:病例定义。Sorden, Swine Health Prod 8(3):133-136, 2000

猪或猪群的诊断:
PMWS: Case definition

2004-2007 年,PCVAD在美国处于流行阶段,因其死亡的生长育肥猪近40%,近10%的美国市场销售短缺。2006年初,生产商极度渴望能出台有效的干预措施。虽然自90年代末起,各种研究小组就鼓励开发商业疫苗,但是截止2006年美国还没有有效的商业疫苗,而截止2007-2008年,商业疫苗还未被广泛使用。已证实商业疫苗非常有效,它能预防死亡引起的巨大损失和浪费,提升猪群总体性能,降低日增重变化。这种用有效商业疫苗防止死亡损失和浪费的统一成功干预措施持续到现在,诊断疾病趋势的说明见图2。

图2:PCVAD诊断的相对次数(ISU VDL)Relative frequency of diagnosis of PCVAD

目前,疫苗对于PCVAD仍然有效,并且几乎所有的美国商品动物都在接种疫苗,原因是PCV2在接种群中一直反复发生,有些地方PCVAD也仍会发生。

 

诊断工具和PCV2变异

诊断测试就是使用的“工具”,这个工具需要经过培训,并且能根据现场临床症状以及宏观微观病理学进行测试解释的人来实施。要求这个诊断结果精准并且一致。没有价值的观察和测试结果应该立即再评估(图3)。这个观念很简单,但在实践中很容易被忽视。假设、诊断偏差和表面情况考虑这些诊断选择都会导致错误的诊断结果。

图3:诊断“一致”:所有信息都应有价值

Diagnostic "alignment": All information should make sense

 

PCVAD基本的诊断测试方法:

  1. 组织切片中抗原或病原的组织病理学检测(免疫组织化学, 原位杂交技术);
  2. 使用分子技术进行基因 (PCR)和性状(测序) 检测。

在组织切片中,免疫组织化学(IHC)是一种说明病变部位病毒抗原的好方法。但是IHC对检测已存在的病毒非常不敏感,其结果解释也偏主观。结果差异时有发生。IHC是受训的病理学家使用的一种方法,当诊断结果不一致时,应该详细检查以达到精准。

 

Staining

选取患有严重肺小叶水肿和间质性肺炎扩散的猪肺,进行免疫组织化学检测,着色部位(棕色)为PCV2阳性。

毋庸置疑,聚合酶链式反应(PCR)是检测特定目标基因最灵敏的方法。一个阳性的PCR检测结果并不能确定病因——它只解答了“在检测样品中是否存在PCV2”的问题。检测猪血清中PCV2含量常用的方法是定量和半定量PCR。一个组织中的病毒血症严重度/病毒量与疾病表现和感染结果相关,这已被证实。猪感染PCV2但未形成临床症状之前会产生病毒-中和抗体,所有3周后才开始病毒血症,病毒量每毫升不可能超过107 基因拷贝数(常常会更少)。出现临床症状的猪,其病毒量超过了这个值,并且会持续更长一段时间。不同实验室之间的结果会有差异,因此猪兽医要熟悉检测过程,才能给每个实验室唯一的结果说明,这是猪兽医义不容辞的责任。

PCR的局限性之一是引物和探针不能检测出目标病毒的变异株。这最近发现的一种新的“突变”株PCV2b中得到证实(也被称为突变体 PCV2b、 mPCV2b 或 PCV2d),这个突变株是从一群“疫苗失效”的猪群中分离。目前,爱荷华州立大学诊断实验室(ISU VDL)通常使用的ORF2 PCV2a/b差分PCR也不能检测临床样品中新型的PCV2,但是ORF1探针PCR结果为阳性。因此,IHC检测PCV2为阳性。这种必须更新PCR探针的想法并不是是新的,在各种病源菌(像PRRSV)检测中很常见。观察或检测结果如果没用,应该重新评估。如果没有兽医的实践反馈,诊断实验室也不可能保留到现在。菌株变异对血清学测试结果的影响目前还没有证实。

一般用ELISA或血清中和方法检测抗体。由于病毒的广泛传染性,血清诊断的价值受限,所以要仔细解释结果。群体血清学分析对确定传染病发生的时间或评估母体抗体对接种疫苗时机的潜在影响有帮助。

Lungs

急性肺水肿综合征和急性PCVAD有时同时出现 与PCV2相关的肺炎的猪棕褐色坚实的肺

 

诊断及评估群体影响

患病猪PCV2作用的诊断仍然与14年前 Sorden描述的一样。因为疫苗的接种效果不可能100%,所以在大猪群中偶然找一头PCVAD猪并不意外。对一个猪群的几头猪观察后就自动把所有的猪群表现变化、发病率或死亡率归因于PCV2,这过于草率,也可能存在其它流行性病原(像细菌、病毒、寄生虫)或其它危害性能的因素(像营养、管理和环境)。一个难以回答的问题是:“一个人如何评估PCVAD在接种疫苗猪群中的影响”。

系统的诊断方法包括全面、系统地监控猪,更加客观、比只检测PCV2更有意的方法是同时监控其它传染性病原的作用(像支原体、PRRSV 、猪流感、放线杆菌、嗜血杆菌、劳森菌、短螺旋菌、沙门氏菌、寄生虫等)。最深入的诊断工具可能是全面验尸,在生长育肥阶段记录所有的死亡猪。如果诊断有可疑或是想排除PCV2的影响,那就将采集的组织样品放在福尔马林内再评估。通常,流行性肺炎、肠炎或慢性浆膜炎是损失的主要原因。常规屠宰检验能增强评估准确性。血清学检测可以帮助确定病原体传播的时期或年龄。可以将确定的多种因素影响进行排名,甚至可以估测潜在的生产损失。不幸的是:在缺乏精心设计和控制猪场发展的实验猪群中,目前还没有评估PCVAD或PCV2亚临床感染影响统一或精准的方法。

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