由于猪流行性腹泻是肠道疾病,故临床病症猪的粪便样本被认为是病毒检测的“黄金标准”。然而,当未表现出临床症状时,用粪便样本监控猪群该病毒的存在和传播具有挑战性。最近,使用口腔液体样本监测众多病毒如蓝耳病毒和流感病毒被认为是一种性价比高的手段。此研究的目的是评估在实验室条件下,对比口腔液体样本和粪便样本监测病毒排毒的效果。
94头4周大的猪被随机分为对照组(n = 40)和攻毒组(n = 56),这些猪均未接触过猪流行性腹泻病毒,且传染性胃肠炎和蓝耳病病毒抗体阴性。2组猪被单独饲养且自由采食。攻毒组猪被随机分到4个饲喂栏,对照组猪随机分到2个饲喂栏。攻毒组经口接种1毫升的猪流行性腹泻病毒株(美国/爱荷华州/18984/2013)4.1×103 PFU/ml。对照组接种1毫升细胞培养液。第一周每24小时,采集每头猪的粪便样本和每个饲喂栏的口腔样本,第二周采集2次,直到接种后56天且定期尸检和采集血清样本。用实时反转录酶-聚合酶链锁反应(RT-PCR)检测口腔和粪便样本的猪流行性腹泻病毒核酸,且对比试验结果的相关性。
攻毒组猪在接种后3-5天出现临床性腹泻,在接种后10天病症消失。根据眼观和显微镜病变和肠道组织组织免疫学染色PEDV阳性判断攻毒组病毒感染。根据口腔和粪便样本的PCR结果可知,病毒排毒开始于攻毒后1天,并在攻毒后3-4天达到峰值。但在攻毒后10天并未观察到病毒感染的临床症状,在攻毒后10-35天的期间内,在粪便和口腔样本中均可检测到最低限度的该病毒核酸。在攻毒后14-17天的口腔样本中可检测到稍微的病毒排毒增加,而在粪便样本中未观察到此种增加。对照组在接种0天的样本和随后采集的所有样本中均未检测到PEDV核酸。
在次研究中,采集了PEDV攻毒猪的粪便和口腔液体样本,并监测攻毒后7周的病毒排毒情况。意外的发现在PEDV感染临床症状消失后的近30天,还能继续监测到病毒排毒。此结果对某些猪场至关重要,这些猪场将PEDV阳性猪的临床症状消失时,将其转到正常猪群中。
攻毒组的口腔和粪便样本的PCR结果显示在排毒持续时间和排毒量上均具有很好的相关性。因此,口腔样本可作为准确的检测PEDV在猪群中存在和传播的手段。尽管口腔样本不能在猪群个体间形成对比信息,但此样本可准确的检测PEDV的存在,并可监测猪群的健康状况。
Leslie Bower, Darin Madson, Hai Hoang, Dong Sun, Luis Gimenez-Lirola, Drew Magstadt, Paulo Arruda, Bailey Wilberts, Kyoungjin Yoon. Utility of oral fluid sampling and testing for monitoring PEDV in herds. 2014 AASV Annual Meeting.